الكشف عن مكونات مزيج من الأحماض الأمينية بطريقة الكروماتوغرافيا الورقية02

الكشف عن مكونات مزيج من الأحماض الأمينية بطريقة الكروماتوغرافيا الورقية02

المــــــــــــــــادة	هندسة الطرائق
المستوى	السنة الثالثة ثانوي
الشعبة	هندسة الطرائق
نوع الملف	doc
صاحب الملف	الأستاذ
تحميـــــــــــــل	الكشف عن مكونات مزيج من الأحماض الأمينية الكروماتوغرافيا 02

يمكنك تحميل الدرس كاملا من الرابط أعلاه أو قراءة نسخة معدلة منه فيما يلي

النشاط العملي رقم 08 : الكشف عن مكونات مزيج من الأحماض الأمينية بطريقة الكرو ماتوغرافيا الورقية

تذكير:

¾  تفاعل الأحماض الأمينية مع النينهيدرين :

à  المرحلة (1) : النينهدرين مؤكسد قوي يؤدي عن طريق تفاعل نزع مجموعة الأمين التأكسدية (désamination oxydative)

الأحماض الأمينية إلى تشكيل نينهدرين مرجعة وألدهيد وتحرر النشادر NH₃ و غاز CO₂ وفق التفاعل التالي :

à  المرحلة (2) : يتفاعل غاز NH₃ مع النينهدرين المرجعة وجزئ آخر من النينهدرين ليعطي مركب ازرق بنفسجي يدعى أرجوان الرومان Pourpre de Ruhemannيستغل هذا التفاعل في الفصل الكروماتوغرافي والمعايرات التلوينية للأحماض الأمينية .

اللون البنفسجي تتناسب مع نوع الأحماض الأمينية ، ماعدا مع البرولين يكون اللون اصفر .

1.    الهدف :

الكشف على الأحماض الأمينية في مزيج بالفصل الكروماتوغرافي .

2.    المبدأ :

à  الكروماتوغرافيا الورقية هي تقنية مستعملة بكثرة من اجل فصل الأحماض الأمينية وتعتمد على اختلاف هجرة المكونات بينطور متحرك عبارة عادة عن مزيج من المذيبات العضوية.

à  يوضع المزيج المراد فصله على الورق الكروماتوغرافي (ورق Wathman أو ورق السيليلوز ) ،ثم يغمس طرفه في المذيب ، بعد مدة يصعد المذيب ويجرف معه مكونات الخليط لتنتقل على مسافات مختلفة حسب نوع كل نكون وقابيليته للذوبان في المذيب المستعمل

à   

3.    المواد والأدوات اللازمة :

المواد	الأدوات
v            مذيب مساعد على الهجرة يتكون من : ×    70mL من بوتانول ×    18mLحمض الخل الثلجي ×    12mLماء مقطر    v            محاول العينة . محاليل مائية للأحماض الأمينية الشاهدة ( ألانين ، برولين ، لوسين......)    v             كاشف : نينهيدرين 0.1g وماء مقطر 10mL	v            أنابيب شعرية أو أنابيب باستور    v            وعاء الفصل الكروماتوغراقي    v            مجفف الشعر    v            ورق الترشيح

ملاحظة :

>  يتم تحضير محاليل الأحماض الأمينية بكميات قليلة جدا كما يمكن الاحتفاظ بها في الثلاجة.

>  يحض الكاشف حديثا ويحفظ في قارورة زجاجية لونة في الدرجة 45C°   .

4.    خطوات العمل :

à  وضع المذيب داخل وعاء الفصل يكون قبل 24 ساعة من بداية التجربة وأن يكون متسوى المذيب أعلى من الخط المرسوم على الورقة .

à  قطع الورقة بعرض أقل من عـرض وعاء الفصل.

à  رسم خط البداية في أسفل الورقة بقلم الرصاص يبعد عن الحافة ب 2cm .

à  أخد محاليل الأحماض الأمينية الشاهدة ومحلول العينة بأنابيب شعرية مختلفة .

à  وضع قطرات المحاليل الشاهدة والعينة في أماكنها المخصصة تفصلها مسافات مححدة علىخط البداية .

à  جفف القطرة بعد وضعها مباشرة حتى لاتتسع في كل مرة مرة تكرار العملية لعدة مرات .

à  ضع الورقة داخل وعاء الفصلوأتركها لمدة كافية لحدوث الهجرة .

à  جفف الورقة داخل المدخنة رشها بالكاشف ثم جفف بمجفف الشعر حتى ظهور بقع ملونة .

5.    النتائج التجريبية :

à  1 ، 2 ، 3 ، 4 الأحماض الأمينية الشاهدة المعلومة .

à  M مزيج الأحماض الأمينية لمحلول العينة .

          في المثال الموجود في الكروماتو غرام بعد رش ورقة الكروماتوغرافيا باشف النينهيدرين

          وتجفيفها داخل المجفف تظهر بقع ملونة بالأزرق البنفسجي .

 1 ، 2 ، 3 ، 4 الأحماض الأمينية الشاهدة المعلومة .

M  مزيج الأحماض الأمينية لمحلول العينة

يتضح من الكرو ماتوغرام أن المزيج أن المزيج M يحتوي على الأحماض

الأمينية 1 ، 2، 3.

6.    تحليل النتائـج..

ظهور 3 بقع متمايزة على مسافات مختلفة يعني أن العينة مكونة من 3 أنواع من الأحماض الأمنية : نحسب لكل واحد منها معدل السريان  R_f=X/Y

X = المسافة التي قطعها الحمض الأميني من خط البدء

Y = المسافة التي قطعها المذيب من خط البدء

قيمة  R_f تتعلق بنوع الورق المستعمل - نوع المذيب - كتلة وبنية الأحماض الأمنية

تعديل المقال